Razvoj neizravne ELISA metode za detekciju IgG protutijela protiv koronavirusa sindroma akutne svinjske dijareje na temelju rekombinantnog spike proteina

Koronavirus sindroma akutnog svinjskog proljeva (SADS-CoV) novootkriveni je svinjski crijevni patogeni koronavirus koji može uzrokovati vodenasti proljev u novorođenih prasadi i uzrokovati značajne ekonomske gubitke svinjogojskoj industriji.Trenutačno ne postoji prikladna serološka metoda za procjenu učinkovitosti SADS-CoV infekcije i cjepiva, tako da postoji hitna potreba za korištenjem učinkovite enzimske imunoanalize (ELISA) kako bi se nadoknadio ovaj nedostatak.Ovdje je konstruiran rekombinantni plazmid koji eksprimira SADS-CoV spike (S) protein fuzioniran s ljudskom IgG Fc domenom za proizvodnju rekombinantnog bakulovirusa i eksprimiran u HEK 293F stanicama.S-Fc protein se pročišćava smolom proteina G i zadržava reaktivnost s anti-humanim Fc i anti-SADS-CoV antitijelima.Zatim je S-Fc protein korišten za razvoj neizravne ELISA (S-iELISA) i optimiziranje uvjeta reakcije S-iELISA.Kao rezultat toga, analizom vrijednosti OD450nm 40 SADS-CoV negativnih seruma potvrđenih imunofluorescentnim testom (IFA) i Western blotom, utvrđeno je da granična vrijednost iznosi 0,3711.Koeficijent varijacije (CV) 6 SADS-CoV pozitivnih seruma unutar i između serija S-iELISA bio je manji od 10%.Test unakrsne reaktivnosti pokazao je da S-iELISA nema unakrsnu reaktivnost s drugim serumima virusa svinja.Nadalje, na temelju detekcije 111 kliničkih uzoraka seruma, ukupna stopa podudarnosti IFA i S-iELISA bila je 97,3%.Test neutralizacije virusa sa 7 različitih vrijednosti OD450nm seruma pokazao je da je vrijednost OD450nm detektirana S-iELISA-om u pozitivnoj korelaciji s testom neutralizacije virusa.Konačno, S-iELISA je provedena na 300 uzoraka seruma s farme svinja.Komercijalni setovi drugih svinjskih enterovirusa pokazali su da su stope IgG pozitivnih na SADS-CoV, TGEV, PDCoV i PEDV bile 81,7%, 54%, odnosno 65,3%., 6%, odnosno.Rezultati pokazuju da je S-iELISA specifična, osjetljiva i ponovljiva te da se može koristiti za otkrivanje infekcije SADS-CoV u svinjogojskoj industriji.Ovaj je članak zaštićen autorskim pravom.Sva prava pridržana.